Josefine Preuß kam 1986 in Zehdenick auf die Welt. Gemeinsam mit ihrer älteren Schwester wuchs sie in Potsdam auf, wo sie bereits im Kindesalter Rollen in der Theatergruppe "Taifun" sowie am "Hans Otto Theater" übernahm. Erste Mattscheibenerfahrungen sammelte Preuß im Ensemble der Jugendserie "Schloss Einstein", wo sie die Rolle der Zicke Anna Reichenbach übernahm. Dieser Charakter sollte Preuß weitere Rollen einbringen und sie vor allem bei den jüngeren Zuschauern bekannt machen. Neben einigen TV-Teeniekomödien wie "Klassenfahrt - Geknutscht wird immer" und "Schüleraustausch - Die Französinnen kommen", war Josefine Preuß unter anderem in den Kurzfilmen "Afterhour" und "Stühle im Schnee" zu sehen. Vor allem "Stühle im Schnee" stellte unter Beweis, dass die Jungschauspielerin auch ernsten Rollen gewachsen war.
Ihre schulische Ausbildung brach Josefine Preuß aufgrund der zunehmenden Engagements ab. Zwischenzeitlich besuchte sie die Schauspielschule "Die Etage" in Berlin. Noch in ihrem letzten Semester brach sie die Ausbildung ab, um den Film "Küss mich, Genosse!" zu drehen. Zwischen 2005 und 2008 spielte Preuß in der ARD-Serie "Türkisch für Anfänger", was ihren Steckbrief nachhaltig beeinflussen sollte. Für ihre Mitwirken wurde sie 2006 als "Beste Darstellerin in einer Comedy-Serie" beim "Festival de Télévision de Monte-Carlo" nominiert. Ein Jahr später folgte die Nominierung als "Beste Schauspielerin" für den "Deutschen Comedypreis". Im selben Jahr erhielt sie stellvertretend für das gesamte "Türkisch für Anfänger"-Darstellerteam den "Adolf-Grimme-Preis".
Und auch in der Kinoadaption "Türkisch für Anfänger - Der Film" übernahm Josefine Preuß 2012 wieder eine Rolle. Fernab des Films arbeitet die Wahl-Berlinerin auch als Hörbuchsprecherin. Dabei wirkte sie unter anderem bei der Produktion "Siebenmeter für die Liebe" mit.