Geboren am 1. März 1978 in Dallas, Texas, begann Jensen Ackles bereits mit vier Jahren zu modeln. Nach seinem High School-Abschluss 1996 beschloss der sexy Schauspieler jedoch, sich voll und ganz der Schauspielerei zu widmen und startete drei Jahre später mit der Seifenoper "Zeit der Sehnsucht" ins TV-Business. Die drei folgenden Jahre war er dort festes Cast-Mitglied.
Später folgten dann Rollen in bekannten TV-Serien wie "Dawsons Creek", "Dark Angel" und "Smallville", bis er mit der Mystery-Serie "Supernatural" seinen großen Durchbruch feierte. Dort ist er seit 2005 als Dämonenjäger Dean Winchester zu sehen und ein Ende der Erfolgsserie scheint nicht in Sicht.
Auf der großen Leinwand feierte der Schauspieler bereits in Blockbustern wie "My Bloody Valentine 3D" Erfolge und auch im Bereich der Videospiele ist er kein Unbekannter. Sowohl in "Tron: Evolution", als auch in "The 3rd Birthday" übernahm er Sprechrollen, wie auch in dem animierten Film "Batman: Under the Red Hood".
Seit Mai 2010 ist Jensen Ackles darüber hinaus mit "One Tree Hill"-Star Danneel Graul verheiratet, mit der er seit 2006 zusammen ist.